病毒经过多代繁殖，毒性会大大衰减，然后用毒性衰减后的病毒使人体产生抗体，这就是减毒疫苗。这种疫苗研制的周期远远大于灭活疫苗。
　　
　　制备减毒疫苗首先要使病毒繁殖很多代，有时甚至需要上百代。每繁殖几代或数十代就要在实验动物身上做毒性实验和安全性实验。如果实验动物发病了，则说明传代的病毒还具有毒性或感染性，需要进一步繁殖病毒。直到实验的动物不再生病，而且用原有的病毒攻击时，也不得病时，才算成功。但这样的研制过程盲目性较大，不是每一种病毒都能筛选到减毒疫苗。目前，科学家可利用分子生物学手段定点和定向的改造或删除病毒基因组内的毒力基因，能极大加快减毒疫苗的构建。
　　
　　但减毒疫苗也有一定的危险性，因为病毒繁殖数代后也有可能在某种情况下又恢复其原有的毒性，也就是通常所说的“返祖”现象。这样，接种疫苗的健康人体反而会感染上病毒。